近期，TwistDx推出了一系列全新的液態(tài)重組酶聚合酶擴增 (RPA)試劑盒，這些試劑盒非常適合需要不使用熱循環(huán)儀就能在15分鐘內完成 DNA/RNA 擴增的實(shí)驗室以及想要靈活構建試驗體系的研究人員使用。

TwistAmp® Liquid試劑盒提供經(jīng)甘油穩定化處理的液態(tài)RPA試劑，該形態(tài)對于在實(shí)驗室執行 PCR 和其他基于酶的反應的任何人來(lái)說(shuō)都非常熟悉。這些試劑各自裝于單獨的試管中，用戶(hù)可隨意從中移取任何量的酶混合液來(lái)構建自己所選的RPA反應體積，配制用于多次反應的預混液，或者以各種 RPA 組分比例進(jìn)行實(shí)驗以?xún)?yōu)化試驗。

除了具有室溫穩定性的凍干態(tài)TwistAmp® RPA試劑盒這一旗艦產(chǎn)品，本次新推出的 TwistAmp® Liquid試劑盒是現場(chǎng)或定點(diǎn)試驗開(kāi)發(fā)的理想之選。液體形態(tài)讓實(shí)驗室更容易地在日常工作中使用快速簡(jiǎn)單的RPA法（該方法有時(shí)甚至采用與PCR相同的引物）取代 PCR法，以及更容易地開(kāi)發(fā)出定制的試驗。

產(chǎn)品組成:

相關(guān)擴展試劑盒額外提供試劑:

◆ 100 µl 50x 外切酶 III (TwistAmp® Liquid exo/exo RT kits);

◆ 100 µl 50x 逆轉錄酶 (RT) (TwistAmp® Liquid Basic RT/exo RT kits);

◆ 100 µl of 陽(yáng)性對照模板 (DNA with TwistAmp® Liquid exo/Basic kits, RNA with TwistAmp® Liquid Basic RT/exo RT kits);

◆ 45 µl of 陽(yáng)性oligo mix (oligo mix consists of primers for Basic/Basic RT kits, primers plus a ?uorescently labelled exo probe in the exo/exo RT kits)

其他必需試劑(非試劑盒提供):

◆ ddH2O; dNTPs; 寡聚核苷酸; RNase抑制劑(僅用于RT試劑盒)

產(chǎn)品信息:

附: TwistAmp liquid試劑盒Q&A

Q 20x核心反應mix有沉淀,是否影響其功能?

A在低溫保存時(shí), 重組酶和輔助蛋白在50%甘油中20x核心反應mix中有時(shí)會(huì )發(fā)生可逆的共沉淀反應.所以在室溫融化混勻后離心使其返回溶液形式并不影響其功能。

Q 使用Liquid試劑盒做多重實(shí)驗，能否制備master mix?

A 可以。Oligos, 2x Reaction Buffer, water, dNTPs and 10x E-mix可以預先混合，置于冰上幾個(gè)小時(shí)，在很多實(shí)例中可以過(guò)夜保存（性能上有任何改變都需要客戶(hù)自行實(shí)驗和評價(jià)）。一旦加入20x核心酶，短期保存在冰上也是可以的。

Q 使用Liquid試劑盒如何提高重復率和RNA模板的擴增率?

A 先將RNA模板和醋酸鎂混合后加入反應體系中，RNA的三級結構會(huì )抑制逆轉錄酶的活性，所以加入RNA和醋酸鎂時(shí)，將兩者分別加到在管內壁兩側或者將醋酸酶加在管內蓋中，同時(shí)離心混入體系，這種操作會(huì )提高反應性能。

Q 在TwistAmp Liquid E-mix中有沉淀，還能使用嗎?

A 可以。少量磷酸肌酸會(huì )發(fā)生沉淀不會(huì )影響RPA反應，只需在實(shí)驗前通過(guò)渦旋將沉淀重懸離心即可。

Q 在使用Liquid試劑盒時(shí)，是否能夠使用dUTP/生物素（酰）化dUTP?

A 可以，請參考

Q 小的RPA液體反應體系是多少?

A 小低至PL級，請參考

Q 液體反應體系中需要加入多少dNTPs?

A 1.8mM(總)dNTPs 作為起始量即可。用戶(hù)也可以根據自身實(shí)驗優(yōu)化濃度,有時(shí)1-12mM均適用。

Q 如何提高擴增曲線(xiàn)的可重復性?

A 優(yōu)化擴增曲線(xiàn)考慮以下因素: 對于低拷貝數模板，不穩定擴增可能是因為達到檢測限或者是反應混勻程度不同（未混勻的反應擴增效率不佳）。另外，在低溫情況下存貯，重組酶和輔助蛋白在50%甘油情況下形成沉淀,也是可能導致不穩定擴增的原因。所以，20x核心反應mix在室溫下解凍并震蕩渦旋將使其成為液體，不影響其功能,并且有效提高擴增效率。不穩定擴增也可能是因為master mix量不足，在加入體系前，用戶(hù)必須保證震蕩后20x核心反應組分均一。